Livrant sa première musique pour la série, Kota Suzuki a dirigé une équipe de composition qui comprenait Hideki Okugawa, Akihiko Narita, Seiko Kobuchi et Wataru Hokoyama. Pour la première fois dans un titre de Resident Evil, la bande-son a bénéficié d'enregistrements orchestraux en direct grâce au Hollywood Studio Symphony Orchestra. La chanson thème «Pray» a été interprétée par la chanteuse Oulimata Niang.
Tracklist de Resident Evil 5 :
A1. Opening -Chris's Arrival- (Original Ver.)
A2. Item Box
A3. Majini I
A4. Majini II
A5. Game Over
A6. Majini III
A7. Result
A8. Executioner
A9. Shaking off The Majini
B1. Shadows of the Past
B2. Majini IV
B3. Majini V
B4. Get out!
B5. The Patrol Boat
B6. Evil Mutation
B7. A New Clue
B8. Ancient Noise
C1. Majini VI
C2. Majini's Trap II
C3. Excella and Wesker
C4. Huge Facility ~And then
C5. Gigantic Attack
C6. The Enigma
C7. Majini VII
C8. UROBOROS
C9. The Mask
D1. Two on Two
D2. Old Friends, New Enemies
D3. Sad but true
D4. Trust
D5. The Tanker
D6. Majini VIII
D7. Shot or Death
D8. Fragment of Fears
E1. The Sign
E2. A Big Despair (Digital Ver.)
E3. Majini IX -in flames-
E4. Wind of Madness (Digital Ver.)
E5. The Vulnerability
E6. Sky-high Skirmish
